【资源】胚胎分割技术可用于生产嵌合体

ldy1990

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胚胎分割技术可用于生产嵌合体。主要是利用显微操作技术,将同种或异种胚胎的卵裂球分离出来,装入同一个透明带中,或将同种或异种动物的半胚融合在一起,或将一枚胚胎的内细胞团注入另一胚胎的囊胚腔中,经体外培养后移植入受体。嵌合体对于研究种间妊娠中母-胎之间的相互作用、妊娠过程中的免疫识别有重要意义。

 

利用人/大鼠嵌合体模型进行人造血干细胞体内分化潜能的研究

许多资料表明,异种动物间建立造血嵌合体是可能的。早在80年代中期,Zanjani等就利用胚胎期免疫系统发育不完善,将人的造血干细胞移植到妊娠中期胚羊腹腔内,成功地建立了人/胎羊造血干细胞嵌合体移植模型,并以此实验模型作为体内检测人造血干细胞和人骨髓间充质干细胞多向分化潜能的方法。但此实验模型操作复杂且实验周期长,大多数实验室不具备利用此实验模型的条件。有研究证明,新生大鼠免疫系统发育不完善,对异种抗原可形成免疫耐受。新生大鼠体积适中,操作方便,且实验周期相对短,可以成为研究干细胞体内检测的实验模型。人/大鼠造血嵌合体不仅可作为人造血干细胞体内检测的实验模型,而且可通过增大人造血干细胞移植剂量;人基质细胞共植入;人特异性细胞因子动员;连续多次植入等方法提高嵌合体中人源细胞比例。人/大鼠嵌合体模型的建立可为人骨髓间充质干细胞、肌肉卫星细胞、神经干细胞等成体干细胞的检测和可塑性研究以及组织和器官移植的研究提供新思路。

 

通过显微注射法构建嵌合体是一项复杂的技术,胚胎干细胞本身的特性、受体胚胎的品系来源以及显微注射的熟练程度等都会直接影响嵌合体的获得。

ESC 全能性的保持是制备嵌合体的先决条件,ESC全能性的丧失就意味着嵌合体制备实验的失败。

一般认为,8 细胞晚期胚的分裂球开始致密化(compact) ,分裂球间建立了紧密连接和缝隙连接,此时引入ESC ,容易与宿主细胞间建立联系,最适于ESC 在早期胚中的定位 ,16细胞期以后,外来ESC 就不易内在化(internalization)

 

国外有学者利用在内源启动子控制下稳定表达lacZ 报告基因的ESC 进行囊胚注射构建嵌合体,观察嵌合鼠胚中ESC 后裔的分布情况,发现尽管注射前将ESC 消化成单细胞悬液,但注射后这些细胞很容易聚集成团,埋于内细胞团细胞中,在以后的胚胎发育中,这些细胞的离散程度也很小,基本不与宿主的内细胞团细胞发生混合,所以嵌合体的毛色呈现为黑白相间,而不是黑白相混的过渡颜色.

2015-08-17 08:09 回复
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